ข้อผิดพลาดทั่วไปสิบประการในการใช้เฟสมือถือเหลว!

ระยะเคลื่อนที่เทียบเท่ากับระยะของเหลวของเลือดและมีหลายสิ่งที่ควรคำนึงถึงระหว่างการใช้งาน ในหมู่พวกเขามี "หลุมพราง" บางอย่างที่ต้องให้ความสนใจ

01. วัดค่า pH ของเฟสเคลื่อนที่หลังจากเติมตัวทำละลายอินทรีย์

หากคุณวัดค่า pH ด้วยสารเติมแต่งอินทรีย์ ค่า pH ที่คุณได้รับจะแตกต่างจากก่อนเติมตัวทำละลายอินทรีย์ อย่างไรก็ตามสิ่งที่สำคัญที่สุดคือการมีความสม่ำเสมอ หากคุณมักจะวัดค่า pH หลังจากเติมตัวทำละลายอินทรีย์แล้ว อย่าลืมระบุขั้นตอนในวิธีที่คุณใช้เพื่อให้ผู้อื่นใช้วิธีเดียวกัน วิธีนี้ไม่ถูกต้อง 100% แต่อย่างน้อยก็จะทำให้วิธีการมีความสม่ำเสมอ นี่อาจสำคัญกว่าการได้รับค่า pH ที่แม่นยำ

02. ไม่มีการใช้บัฟเฟอร์

วัตถุประสงค์ของบัฟเฟอร์คือเพื่อควบคุม pH และป้องกันไม่ให้เปลี่ยนแปลง วิธีการอื่นๆ อีกหลายวิธีจะเปลี่ยนค่า pH ของเฟสเคลื่อนที่ ซึ่งอาจทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงของเวลาการเก็บรักษา รูปร่างสูงสุด และการตอบสนองสูงสุด

กรดฟอร์มิก, TFA ฯลฯ ไม่ใช่บัฟเฟอร์

03. ไม่ใช้บัฟเฟอร์ในช่วง pH ปกติ

บัฟเฟอร์แต่ละตัวมีความกว้างของช่วง pH 2 หน่วย ซึ่งให้ความคงตัวของค่า pH ที่ดีที่สุด บัฟเฟอร์ที่อยู่นอกหน้าต่างนี้จะไม่สามารถต้านทานการเปลี่ยนแปลง pH ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ใช้บัฟเฟอร์ในช่วงที่ถูกต้อง หรือเลือกบัฟเฟอร์ที่ครอบคลุมช่วง pH ที่คุณต้องการ

04. เพิ่มบัฟเฟอร์ลงในสารละลายออร์แกนิก

การผสมสารละลายบัฟเฟอร์กับเฟสอินทรีย์มักจะทำให้บัฟเฟอร์ตกตะกอน ในหลายกรณีถึงแม้จะมีการตกตะกอน แต่ก็ยังตรวจพบได้ยาก อย่าลืมเติมสารละลายอินทรีย์ลงในเฟสที่เป็นน้ำเสมอ ซึ่งสามารถลดโอกาสที่บัฟเฟอร์จะตกตะกอนได้อย่างมาก

05. ผสมการไล่ระดับความเข้มข้นจาก 0% ด้วยปั๊ม

ปั๊มที่มีอยู่ในปัจจุบันสามารถผสมเฟสเคลื่อนที่และเดกาส์แบบอินไลน์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ แต่ไม่ใช่ทุกคนที่ใช้วิธีการของคุณจะมีปั๊มคุณภาพสูง ผสม A และ B ให้เป็นสารละลายเดียวและรันแบบอินไลน์ 100%

ตัวอย่างเช่น สามารถเตรียมส่วนผสมเริ่มต้นออร์แกนิก 950 มล. ได้โดยผสมกับน้ำ 50 มล. ข้อดีของสิ่งนี้คือสามารถลดความแปรปรวนระหว่าง HPLC และลดโอกาสที่จะเกิดฟองอากาศและการตกตะกอนในระบบ เป็นที่น่าสังเกตว่าอัตราส่วนของส่วนผสมของปั๊มคือ 95:5 ซึ่งไม่ได้หมายความว่าเวลาเก็บรักษาที่ผสมไว้ล่วงหน้าในขวดจะเป็น 95:5 เช่นกัน

06. ไม่ใช้กรด (เบส) ดัดแปลงที่ถูกต้องในการเปลี่ยนบัฟเฟอร์

ใช้เฉพาะกรดหรือเบสที่สร้างเกลือบัฟเฟอร์ที่คุณใช้เท่านั้น ตัวอย่างเช่น ควรเตรียมบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตด้วยกรดฟอสฟอริกหรือโซเดียมไฮดรอกไซด์เท่านั้น

07. ไม่ได้ระบุข้อมูลทั้งหมดเกี่ยวกับบัฟเฟอร์ในวิธีการ เช่น เพิ่ม 5g ของโซเดียมฟอสเฟตต่อน้ำ 1,000 มล.

ประเภทของบัฟเฟอร์จะกำหนดช่วง pH ที่สามารถบัฟเฟอร์ได้ ความเข้มข้นที่ต้องการจะกำหนดความแรงของบัฟเฟอร์ 5 กรัมหรือโซเดียมฟอสเฟตปราศจากน้ำและโมโนโซเดียมฟอสเฟตโมโนไฮเดรต 5 กรัมมีความแข็งแรงของบัฟเฟอร์ต่างกัน

08. เติมตัวทำละลายอินทรีย์ก่อนตรวจสอบ

หากวิธีก่อนหน้านี้ใช้สารละลายบัฟเฟอร์สำหรับเส้นฐาน B และวิธีการของคุณใช้สารละลายอินทรีย์สำหรับเส้นฐาน B คุณหวังว่าจะสามารถชำระบัฟเฟอร์ในท่อปั๊มและหัวปั๊มได้

09. ยกขวดขึ้นและเทน้ำหยดสุดท้ายออก

มีโอกาสที่ดีที่คุณจะไม่มีเฟสเคลื่อนที่เพียงพอที่จะดำเนินการทั้งหมดให้เสร็จสิ้น และตัวอย่างของคุณจะควัน นอกจากความเป็นไปได้ที่ระบบปั๊มและคอลัมน์จะไหม้แล้ว เฟสเคลื่อนที่จะระเหยไปจนหมด และเฟสเคลื่อนที่ที่ด้านบนของขวดจะเปลี่ยนไป

10. ใช้เฟสมือถือ degassing อัลตราโซนิก

จุดที่สำคัญที่สุดคือต้องแน่ใจว่าเกลือบัฟเฟอร์ทั้งหมดละลาย แต่นี่เป็นวิธีที่แย่ที่สุดในการขจัดแก๊ส และจะทำให้เฟสเคลื่อนที่ร้อนขึ้นอย่างรวดเร็ว ส่งผลให้ส่วนประกอบอินทรีย์ระเหยไป เพื่อบันทึกปัญหาที่ไม่จำเป็นในภายหลัง ใช้เวลาห้านาทีเพื่อดูดฝุ่นกรองเฟสมือถือของคุณ