หลักการและวิธีการวิเคราะห์เชิงปริมาณโดยโครมาโตกราฟีของเหลว

กลไกการแยกของโครมาโตกราฟีของเหลวขึ้นอยู่กับความแตกต่างในความสัมพันธ์ของส่วนประกอบในส่วนผสมของทั้งสองเฟส

ตามเฟสคงที่ต่างๆ โครมาโตกราฟีของเหลวจะถูกแบ่งออกเป็นโครมาโตกราฟีแบบของเหลว-ของแข็ง โครมาโตกราฟีแบบของเหลว-ของเหลว และโครมาโตกราฟีเฟสแบบพันธะที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดคือโครมาโตกราฟีของเหลว-ของแข็งที่มีซิลิกาเจลเป็นสารตัวเติม และโครมาโตกราฟีแบบเฟสพันธะที่มีไมโครซิลิกาเป็นเมทริกซ์

ตามรูปแบบของเฟสคงที่ โครมาโตกราฟีของเหลวสามารถแบ่งออกเป็นคอลัมน์โครมาโตกราฟี โครมาโตกราฟีแบบกระดาษ และโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางตามความสามารถในการดูดซับสามารถแบ่งออกเป็นโครมาโตกราฟีแบบดูดซับ, โครมาโตกราฟีแบบแบ่งพาร์ติชัน, โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนและโครมาโตกราฟีแบบซึมผ่านของเจล

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา มีการเพิ่มระบบการไหลของของเหลวแรงดันสูงลงในระบบโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ของเหลวเพื่อให้เฟสเคลื่อนที่ไหลอย่างรวดเร็วภายใต้แรงดันสูงเพื่อปรับปรุงผลการแยกตัว โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (หรือที่เรียกว่าแรงดันสูง) ได้โผล่ออกมา.

ส่วนหนึ่ง
01 หลักการวิเคราะห์เชิงปริมาณของโครมาโตกราฟีของเหลว

ในการวัดปริมาณบนพื้นฐานของคุณภาพ ต้องใช้สารบริสุทธิ์เป็นมาตรฐาน

การหาปริมาณโครมาโตกราฟีของเหลวเป็นวิธีการเชิงปริมาณที่ค่อนข้างมาก กล่าวคือ ปริมาณของสารวิเคราะห์ในส่วนผสมนั้นประมาณจากปริมาณตัวอย่างมาตรฐานบริสุทธิ์ที่ทราบ

ส่วนหนึ่ง
02 พื้นฐานสำหรับการหาปริมาณโดยโครมาโตกราฟีของเหลว

ปริมาณขององค์ประกอบที่วัดได้ (W) จะเป็นสัดส่วนกับค่าการตอบสนอง (A) (ความสูงสูงสุดหรือพื้นที่จุดสูงสุด) W=f×A

ปัจจัยการแก้ไขเชิงปริมาณ (f): เป็นค่าคงที่สัดส่วนของสูตรการคำนวณเชิงปริมาณ และความหมายทางกายภาพของมันคือจำนวนขององค์ประกอบที่วัดได้ซึ่งแสดงด้วยค่าตอบสนองของหน่วย (พื้นที่พีค)

ค่าปัจจัยการแก้ไขเชิงปริมาณสามารถหาได้จากจำนวนตัวอย่างมาตรฐานที่ทราบและค่าการตอบสนอง

วัดค่าการตอบสนองของส่วนประกอบที่ไม่รู้จัก และปริมาณของส่วนประกอบสามารถรับได้จากปัจจัยการแก้ไขเชิงปริมาณ

ส่วนหนึ่ง
03 ศัพท์ทั่วไปในการวิเคราะห์เชิงปริมาณ

ตัวอย่าง (ตัวอย่าง): สารละลายที่มีสารวิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีแบ่งออกเป็นตัวอย่างมาตรฐานและไม่ทราบ

มาตรฐาน: ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ที่มีความเข้มข้นที่ทราบตัวอย่างที่ไม่รู้จัก (ไม่ทราบ): ของผสมที่จะทดสอบความเข้มข้น

น้ำหนักตัวอย่าง: การชั่งน้ำหนักเดิมของตัวอย่างที่จะทดสอบ

การเจือจาง: ปัจจัยการเจือจางของกลุ่มตัวอย่างที่ไม่รู้จัก

ส่วนประกอบ : พีคของโครมาโตกราฟีที่จะวิเคราะห์ในเชิงปริมาณ ซึ่งก็คือตัววิเคราะห์ที่ไม่ทราบเนื้อหา

ปริมาณส่วนประกอบ (จำนวน): ปริมาณ (หรือความเข้มข้น) ของสารที่จะทดสอบ

ความสมบูรณ์ : กระบวนการคำนวณในการวัดพื้นที่พีคของพีคโครมาโตกราฟีด้วยคอมพิวเตอร์

เส้นโค้งการปรับเทียบ: เส้นโค้งเชิงเส้นของเนื้อหาองค์ประกอบเทียบกับค่าการตอบสนอง ซึ่งสร้างขึ้นจากปริมาณสารมาตรฐานที่ทราบ ซึ่งใช้ในการระบุเนื้อหาที่ไม่รู้จักของสารวิเคราะห์

ส่วนหนึ่ง
04 การวิเคราะห์เชิงปริมาณของโครมาโตกราฟีของเหลว

1. เลือกวิธีโครมาโทกราฟีที่เหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ:

l ตรวจสอบจุดสูงสุดของส่วนประกอบที่ตรวจพบและบรรลุความละเอียด (R) ที่มากกว่า 1.5

l ตรวจสอบความสอดคล้อง (ความบริสุทธิ์) ของพีคโครมาโตกราฟีของส่วนประกอบที่ทดสอบ

กำหนดขีดจำกัดการตรวจจับและขีดจำกัดปริมาณของวิธีการความไวและช่วงเชิงเส้น

2. สร้างเส้นโค้งการสอบเทียบด้วยตัวอย่างมาตรฐานที่มีความเข้มข้นต่างกัน

3. ตรวจสอบความถูกต้องและแม่นยำของวิธีการเชิงปริมาณ

4. ใช้ซอฟต์แวร์การจัดการโครมาโตกราฟีที่เกี่ยวข้องเพื่อใช้การเก็บตัวอย่าง การประมวลผลข้อมูล และรายงานผลลัพธ์

ส่วนหนึ่ง
05 การระบุจุดสูงสุดเชิงปริมาณ (เชิงคุณภาพ)

ระบุพีคโครมาโตกราฟีแต่ละรายการในเชิงคุณภาพที่ต้องการหาปริมาณ

ขั้นแรก ให้ใช้ตัวอย่างมาตรฐานเพื่อกำหนดเวลาการคงอยู่ (Rt) ของพีคของโครมาโทกราฟีที่จะหาปริมาณเมื่อเปรียบเทียบเวลาเก็บรักษา ให้ค้นหาส่วนประกอบที่ตรงกับพีคโครมาโทกราฟีแต่ละค่าในตัวอย่างที่ไม่รู้จักวิธีโครมาโตกราฟีเชิงคุณภาพคือการเปรียบเทียบเวลาคงอยู่กับตัวอย่างมาตรฐานเกณฑ์ไม่เพียงพอการยืนยันเพิ่มเติม (เชิงคุณภาพ)

1. วิธีการเติมมาตรฐาน

2. ใช้วิธีการอื่นในเวลาเดียวกัน: วิธีโครมาโตกราฟีอื่นๆ (เปลี่ยนกลไก เช่น: การใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟีที่แตกต่างกัน) เครื่องมือตรวจจับอื่นๆ (PDA: การเปรียบเทียบสเปกตรัม, การค้นหาไลบรารีสเปกตรัม; MS: การวิเคราะห์สเปกตรัมมวล, การค้นหาไลบรารีสเปกตรัม)

3. เครื่องมือและวิธีการอื่นๆ

ส่วนหนึ่ง
06 การยืนยันความสม่ำเสมอของจุดสูงสุดเชิงปริมาณ

ยืนยันความสอดคล้องสูงสุดของโครมาโตกราฟี (ความบริสุทธิ์)

ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามีองค์ประกอบที่วัดได้เพียงองค์ประกอบเดียวภายใต้แต่ละพีคของโครมาโตกราฟี

ตรวจสอบการรบกวนจากสารที่ชะล้างร่วม (สิ่งเจือปน)

วิธีการยืนยันความสม่ำเสมอพีคของโครมาโตกราฟี (ความบริสุทธิ์)

การเปรียบเทียบสเปกโตรแกรมกับเครื่องตรวจจับโฟโตไดโอดเมทริกซ์ (PDA)

การระบุความบริสุทธิ์สูงสุด

2996 ทฤษฎีมุมบริสุทธิ์

วิธีการเชิงปริมาณที่ใช้กันทั่วไปในภาค 07

วิธีเส้นโค้งมาตรฐาน แบ่งออกเป็นวิธีมาตรฐานภายนอกและวิธีมาตรฐานภายใน:

1. วิธีมาตรฐานภายนอก: ใช้มากที่สุดในโครมาโทกราฟีของเหลว

ชุดของตัวอย่างมาตรฐานของความเข้มข้นที่ทราบถูกเตรียมโดยใช้ตัวอย่างบริสุทธิ์ของสารประกอบที่จะทดสอบเป็นตัวอย่างมาตรฐานฉีดเข้าไปในคอลัมน์จนถึงค่าตอบสนอง (พื้นที่สูงสุด)
ภายในช่วงหนึ่ง มีความสัมพันธ์เชิงเส้นที่ดีระหว่างความเข้มข้นของตัวอย่างมาตรฐานและค่าตอบสนอง ซึ่งก็คือ W= f×A และทำให้เกิดเส้นโค้งมาตรฐาน

ภายใต้เงื่อนไขการทดลองเดียวกัน ให้ฉีดตัวอย่างที่ไม่รู้จักเพื่อให้ได้ค่าการตอบสนองของส่วนประกอบที่จะวัดตามค่าสัมประสิทธิ์ที่ทราบ f สามารถรับความเข้มข้นของส่วนประกอบที่จะวัดได้

ข้อดีของวิธีมาตรฐานภายนอก:การดำเนินการและการคำนวณที่เรียบง่าย เป็นวิธีเชิงปริมาณที่ใช้กันทั่วไปไม่จำเป็นต้องตรวจจับและชะแต่ละส่วนประกอบต้องมีตัวอย่างมาตรฐานเงื่อนไขการวัดตัวอย่างมาตรฐานและตัวอย่างที่ไม่รู้จักควรสอดคล้องกันปริมาณการฉีดควรจะแม่นยำ

ข้อเสียของวิธีมาตรฐานภายนอก:เงื่อนไขการทดลองจะต้องสูง เช่น ความไวของเครื่องตรวจจับ อัตราการไหล และองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ไม่สามารถเปลี่ยนแปลงได้ปริมาตรของการฉีดแต่ละครั้งควรมีความสามารถในการทำซ้ำได้ดี

2. วิธีมาตรฐานภายใน: แม่นยำ แต่ยุ่งยาก ใช้มากที่สุดในวิธีมาตรฐาน

มาตรฐานภายในจำนวนที่ทราบจะถูกเพิ่มเข้าไปในมาตรฐานเพื่อสร้างมาตรฐานผสม และเตรียมชุดมาตรฐานการทำงานที่มีความเข้มข้นที่ทราบไว้อัตราส่วนโมลของมาตรฐานต่อมาตรฐานภายในในมาตรฐานผสมยังคงไม่เปลี่ยนแปลงฉีดเข้าไปในคอลัมน์โครมาโตกราฟีแล้วนำ (พื้นที่พีคของตัวอย่างมาตรฐาน/พื้นที่พีคของตัวอย่างมาตรฐานภายใน) เป็นค่าตอบสนองตามความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างค่าตอบสนองและความเข้มข้นของมาตรฐานการทำงาน ซึ่งก็คือ W= f×A จะทำให้เกิดเส้นโค้งมาตรฐาน

มาตรฐานภายในจำนวนที่ทราบจะถูกเพิ่มลงในตัวอย่างที่ไม่รู้จักและฉีดเข้าไปในคอลัมน์เพื่อให้ได้ค่าการตอบสนองของส่วนประกอบที่จะวัดตามค่าสัมประสิทธิ์ที่ทราบ f สามารถรับความเข้มข้นของส่วนประกอบที่จะวัดได้

ลักษณะของวิธีมาตรฐานภายใน:ในระหว่างการดำเนินการ ตัวอย่างและมาตรฐานภายในจะถูกผสมเข้าด้วยกันและฉีดเข้าไปในคอลัมน์โครมาโตกราฟี ดังนั้น ตราบใดที่อัตราส่วนของปริมาณของส่วนประกอบที่วัดได้ต่อมาตรฐานภายในในสารละลายผสมนั้นคงที่ การเปลี่ยนแปลงของปริมาตรตัวอย่าง จะไม่ส่งผลกระทบต่อผลลัพธ์เชิงปริมาณ.วิธีมาตรฐานภายในจะชดเชยอิทธิพลของปริมาตรตัวอย่าง และแม้แต่เฟสเคลื่อนที่และตัวตรวจจับ ดังนั้นจึงมีความแม่นยำมากกว่าวิธีมาตรฐานภายนอก

ส่วนหนึ่ง
08 ปัจจัยที่ส่งผลต่อผลการวิเคราะห์เชิงปริมาณ

ความแม่นยำต่ำอาจเกิดจาก:

การรวมพื้นที่จุดสูงสุดไม่ถูกต้อง การสลายตัวของตัวอย่างหรือสิ่งเจือปนที่เกิดขึ้นระหว่างการเตรียมตัวอย่าง ขวดบรรจุตัวอย่างไม่ได้ปิดผนึก การระเหยของตัวอย่างหรือตัวทำละลาย การเตรียมตัวอย่างไม่ถูกต้อง ปัญหาในการฉีดตัวอย่าง การเตรียมมาตรฐานภายในไม่ถูกต้อง

สาเหตุที่เป็นไปได้สำหรับความแม่นยำต่ำ:

การรวมจุดสูงสุดที่ไม่ถูกต้อง ปัญหาในการฉีดหรือหัวฉีด การสลายตัวของตัวอย่างหรือสิ่งเจือปนที่เกิดขึ้นระหว่างการเตรียมตัวอย่าง ปัญหาทางโครมาโตกราฟี การตอบสนองของเครื่องตรวจจับลดลง